Obsah

• Na krok
• Časť 1 z 2: Kontrola kalibrácie
• Časť 2 z 2: Výpočet výsledkov

Pipeta je typ laboratórneho zariadenia používaného na meranie a prenos veľmi malého množstva kvapaliny. Presnosť a presnosť merania pipety je nevyhnutná, pretože akákoľvek odchýlka v dodaných objemoch môže ovplyvniť výsledky experimentu. Pre zaistenie presnosti je potrebné každých pár mesiacov skontrolovať kalibráciu pipety. Proces kalibrácie pomáha overiť, či zariadenie vydáva správne objemy, aby bolo možné ho obnoviť, ak nie je.

Na krok

Časť 1 z 2: Kontrola kalibrácie

1. Zhromaždite potrebné materiály. Na kontrolu kalibrácie pipety potrebujete pipetu, pipetovacie špičky, destilovanú vodu, kadičku, teplomer, váhu a misky. Váha musí byť špecifická pre mikrogramy na kalibráciu mikropipiet s maximom 1 µl.
   • Nepotrebujete viac ako 5 ml vody. Naplňte pohár vodou.
   • Uistite sa, že hroty pipety zapadajú správne.
2. Zmerajte teplotu destilovanej vody. Vložte teplomer do vody a nechajte ho stáť najmenej jednu minútu. Ak sa červená čiara na teplomere stále pohybuje, nechajte ju ešte jednu minútu. Po minúte si teplotu zapíšte do zošita. Vyberte teplomer a po dokončení ho vysušte.
   • Teplota vody je dôležitá pre výpočty vykonané na kontrolu kalibrácie.
3. Položte váhu na váhu a vynulujte ju. Ideálne je použiť váhu s dverami a izolovanou miestnosťou. Umiestnite misku do miestnosti a zatvorte dvere. Ak nie sú žiadne dvere, stačí misku položiť na váhu. Stlačte tlačidlo „Nula“ alebo „Tára“ a počkajte, kým váha nebude čítať nulu.
   • Nastavením vyváženia na nulu sa neberie do úvahy hmotnosť plastovej misky a je možné merať iba hmotnosť toho, čo ste do misky vložili.
4. Pripravte pipetu na kalibráciu. Pred začiatkom pipetu utrite etanolom, aby ste zabránili kontaminácii - okrem toho skontrolujte, či nie je špička pipety upchatá. Na koniec umiestnite správny hrot a nastavte hlasitosť, ktorú chcete testovať.
   • Pred kalibráciou otestujete najmenší aj najväčší objem, ktorý môže pipeta dávkovať.
5. Špičku pred kalibráciou prepláchnite. Zatlačte gombík až po prvý doraz a vložte hrot do destilovanej vody tak, aby boli asi 2 mm ponorené v kvapaline. Uvoľnite tlačidlo, aby ste natiahli trochu kvapaliny, a potom ju znova nadávkujte stlačením tlačidla nadol. Opakujte to trikrát, aby ste špičku vypláchli.
   • Zatlačte tlačidlo na druhú zarážku, aby ste vypustili všetku tekutinu zostávajúcu v hrote, a vyberte pipetu z vody.
6. Natiahnite kalibračný objem. Špičkou vytekajúcou z kvapaliny stlačte gombík dole až po prvý doraz. Vložte asi 2 mm od špičky do destilovanej vody a uvoľnite gombík, aby sa tekutina natiahla do špičky. Pred vybratím špičky z vody počkajte asi sekundu.
   • Uistite sa, že je špička počas celého procesu nasávania úplne ponorená. Nechcete, aby boli v hrote bubliny, alebo nebude výsledok správny.
7. Na misku váhy dávkujte tekutinu. Hrot položte na dno misky a stlačte gombík dole až po prvý doraz. Presuňte sa na iné miesto, mierne ďaleko od vody, a stlačte tlačidlo na druhú zarážku. Podržte stlačené tlačidlo a zdvihnite špičku misky.
   • Špičku nechajte na pipete, pretože ju budete znova používať na ďalšie kalibračné testy. Uistite sa, že sa hrot ničoho nedotýka.
8. Zaznamenajte váhu, ktorá označuje rovnováhu. Ak používate váhu v izolovanej miestnosti, zatvorte dvere. Počkajte, kým sa hodnoty prestanú meniť. Túto hodnotu si zaznamenajte do svojho notebooku.
   • Pred zapísaním je dôležité počkať, kým sa číslo stabilizuje. Ak nebudete čakať, vaše čítania budú nesprávne.
9. Tento postup opakujte, kým neurobíte aspoň 10 meraní. Nastavte váhu na nulu, prepláchnite špičku, natiahnite rovnaký objem, vydajte objem a potom zaznamenajte hmotnosť. Potrebujete viac nahrávok s rovnakým objemom a potom môžete vziať priemer všetkých nahrávok dohromady.
   • Rovnaký postup môžete opakovať s rôznymi objemami, pokiaľ na jeden objem vykonáte viac meraní.

Časť 2 z 2: Výpočet výsledkov

1. Použite vzorec pre vypočítaný objem. Vzorec pre výpočet objemu dodaného pipetou je V = w * Z, kde w je hmotnosť vody, Z je konverzný faktor založený na hustote vody a V je vypočítaný objem koľko vody tam je odovzdaný.
   • Premennú Z nájdete tak, že vyhľadáte hustotu vody pomocou teploty zaznamenanej na začiatku experimentu.
   • Napríklad: Ak bola teplota vody 23 ° C, potom predpokladáte hodnotu Z 1,0035 µg / mg.
2. Vypočítajte priemer z opakovaných pokusov. Určite ste odvážili objem vody vydanej pipetou najmenej 10-krát. Ak chcete vypočítať priemer všetkých týchto hodnôt, spočítajte ich spolu a vydeľte ich 10. Ak ste vykonali viac alebo menej pokusov, pridajte každý pokus a vydeľte súčet celkovým počtom pokusov.
   • Napríklad: Desať váh, ktoré ste zaregistrovali pre objem 10 μl pipety, je nasledovných: 9,89, 10,01, 10,02, 9,99, 9,95, 10,04, 9,96, 10,01, 9,99 a 9,98.
   • Priemer je: (9,89 + 10,01 + 10,02 + 9,99 + 9,95+ 10,04 + 9,96 + 10,01 + 9,99 + 9,98) / 10 = 99, 84/10 = 9,984.
3. Aplikujte premenné na rovnicu a vyriešte to. Keď určíte správne hodnoty pre každú premennú, môžete ich začleniť do rovnice a vyriešiť vypočítaný objem. Aby ste to vyriešili, jednoducho vynásobte priemernú hmotnosť všetkých testovaných hodnôt hodnotou Z.
   • Napríklad: V = w * Z = 9,984 * 1,0035 = 10,019
4. Vypočítajte presnosť pipety. Na výpočet presnosti môžete použiť rovnicu A = 100 x V._priem/ V₀ kde A je presnosť pipety, V._priem priemerný vypočítaný objem a V.₀ hodnota, ktorú ste nastavili pre pipetu. Presnosť musí byť medzi 99 - 101%.
   • Ak je pipeta správne kalibrovaná, vypočítaná hodnota by mala byť veľmi blízko skutočnej hodnote, ktorú ste nastavili na pipete.
   • Napríklad: A = 100 x V_priem/ V₀ = 100 x 10,019 / 10 = 100 x 1,0019 = 100,19%
   • Táto pipeta je správne kalibrovaná.
5. Ak je to potrebné, pošlite pipetu na kalibráciu. Ak vaša pipeta zlyhá v kalibračnom teste, okamžite ju prestaňte používať na experimenty. Pipety sú veľmi chúlostivé a drahé časti laboratórneho vybavenia. Kalibráciu nemôžete opraviť sami, takže ju budete musieť zaslať kvôli správnej údržbe. Prípadne niektoré spoločnosti prídu do vášho laboratória a vykonajú tam kalibráciu vašich pipiet.
   • Ohľadne údržby sa obráťte na spoločnosť, ktorá vyrába vašu konkrétnu značku pipety.